[ODP5B] b. Methods in Detection and Identification of Clinical Microbes

[ODP-092] Optimization of synthesis conditions for antimicrobial capsid applicable to bacterial gene detection

○Yutaro Nishikawa^1,2, Kotaro Kiga², Shinya Watanabe², XinEe Tan², Takako Suzuki¹, Takayuki Simojo¹, Longzhu Cui² (¹EIKEN CHEMICAL CO.,LTD, ²Div. Bacteriology, Dept. Infection and Immunity, Sch. Medicine, Jichi Medical Univ.)

【目的】CRISPR-Cas13を細菌に導入すれば特定の遺伝子を保有する細菌を選択的に殺菌することができる。我々は，CRISPR-Cas13を対象細菌に導入するため，バクテリオファージ（ファージ）のカプシドにこの遺伝子群を搭載した抗菌カプシドを開発した。また，本抗菌カプシドの塩基配列特異的殺菌活性を利用して，遺伝子増幅が不要の細菌遺伝子検査法およびジェノタイピング法を開発している。本抗菌カプシドの作製は，ブドウ球菌病原遺伝子島（SaPI）とヘルパーファージが細菌の染色体上に共存する条件下で，マイトマイシンC等によるSOS応答を誘導して行う。しかし，これまでの抗菌カプシド作製の条件では収量が低く，製品化が難しいという問題があった。そこで我々は，抗菌カプシドの収量を上げるため，作製条件の最適化を行った。
【方法】上記作製法を元に，様々な条件下で作製して得られた抗菌カプシドを黄色ブドウ球菌に添加し，形質導入効率を比較することで抗菌カプシドの収量を比較した。
【結果】培地の組成，培養温度，マイトマシンの濃度・添加のタイミングを最適化することで，抗菌カプシドの収量を約10倍に増やすことに成功した。