Oral

[O3-E-AM1-01] Expression andpossible function of CCN2-derived circRNAs in chondrocytes

〇Soma Kato^1,2, Kazumi Kawata^1,3, Takashi Nishida¹, Masaharu Takigawa³, Satoshi Kubota¹ (1. Dept Biochem Mol Dent, Okayama Univ Grad Sch Med Dent Pharm Sci, 2. Dept Oral Maxillofac Reconstr Surg, Okayama Univ Grad Sch Med Dent Pharm Sci, 3. Adv Res Ctr Oral Craniofacial Sci, Okayama Univ Grad Sch Med Dent Pharm Sci)

Keywords:CCN2、circRNA、ACAN

Cellular communication network factor (CCN) 2分子は軟骨細胞分化や増殖を促進する。一方、環状RNA (circRNA)はバックスプライシングによって生成され、遺伝子発現を制御する。CCN2の由来circRNAの発現の報告は血管内皮細胞ではあるものの、軟骨細胞においてはこれまでにない。そこで、我々は、軟骨細胞におけるCCN2由来circRNAの発現と機能について検討を行った。まず、ヒト軟骨細胞様細胞株HCS-2/8細胞から抽出したRNAに対してRNase R処理を行い、直鎖状RNAを除去した後、CCN2由来circRNA検出プライマーを用いてPCRを行った。その後のアガロース電気泳動の結果、RNase R処理の有無に関わらず、一定の位置にバンドが確認された。更に、確認されたバンドの塩基配列構造を決定した結果、環状RNAの特徴を有していた。次に、CCN2由来circRNAの軟骨細胞における機能を検討するため、マウス軟骨前駆細胞株ATDC5細胞から経時的にRNAを回収し、HCS-2/8細胞と同様にPCRを行ったところ、Ccn2由来circRNAが複数検出され、分化誘導後12日目にこれらのcircRNAの発現量はピークに達した。更に詳細に軟骨細胞でのCCN2由来circRNAの機能を検討するため、HCS-2/8細胞においてCCN2由来circRNAをノックダウンしたところ、軟骨細胞分化マーカー遺伝子のひとつACANに有意な発現量の減少が認められた。以上より、軟骨細胞においてもCCN2由来circRNAは発現しており、これらのcircRNAは軟骨細胞分化に関与することが示唆された。このCCN2由来circRNAは、ACANを抑制するmiRNAの標的塩基配列をもつため、これを吸着することでACANの発現を促進したと考えられる。