[P3-31] Bogliottiらの方法 (2018) によるウシES様細胞樹立の試み
【目的】線維芽細胞増殖因子2（FGF2）およびWntシグナル阻害剤（IWR1）を添加した培養液でウシ胚盤胞を培養することにより，安定した多能性維持および増殖能を示すウシES細胞を樹立できることが報告された（Bogliotti et al., PNAS 2018）。そこで本研究では，Bogliottiらの方法に準じてウシES細胞の樹立を試みた。【方法および結果】+FGF2+IWR1培養液とフィーダー細胞を用い，体外受精ウシ胚盤胞からウシES様細胞株を得ることができた（8クローン / 胚盤胞29個）。得られたウシES様細胞は扁平なプライム型の細胞コロニーを形成し，Bogliottiらにより報告されたウシES細胞に酷似していた。代表的なES様細胞株において，ES細胞マーカーSOX2タンパク質の発現が免疫蛍光染色により検出された。胚様体形成法により分化誘導して遺伝子発現を検証したところ，SOX2発現は分化誘導前後いずれにおいても検出された。一方，OCT4発現は分化誘導前後いずれにおいてもほとんど検出されず，NANOG発現は分化誘導に伴い上昇した。また，三胚葉分化マーカーの発現は分化誘導処理に伴い上昇した。以上の結果より，作出したウシES様細胞は三胚葉への分化能を有することが示された。一方，ES細胞マーカーの発現動態は，Bogliottiらが作出したウシES細胞と相違が認められた。