形態・生理

[VII-20-16] 筋幹細胞活性化因子HGFのニトロ化による不活化に関する研究：
抗HGFモノクローナル抗体のニトロ化抑制効果の検証

*Sakiho Tanaka¹, Alaa Elgaabari^2,3, Kahona Zushi¹, Shoko Sawano^2,4, Wataru Mizunoya^2,5, Yuji Matsuyoshi¹, Takahiro Suzuki², Mako Nakamura², Ryuichi Tatsumi² (1. Graduate School of Bioresource and Bioenvironmental Sciences, Kyushu Univ., 2. Research Faculty of Agriculture, Graduate School of Agriculture, Kyushu Univ., 3. Kafrelsheikh University (Egypt), 4. Department of Food and Life Science, School of Life and Environmental Science, Azabu Univ., 5. Department of Animal Science and Biotechnology, School of Veterinary Medicine, Azabu Univ.)

【目的】筋幹細胞（衛星細胞）の活性化因子である肝細胞増殖因子(HGF)のチロシン残基(Y)198, 250がニトロ化されると生理活性を失うことを見出し、この現象が加齢性筋萎縮および再生不全(線維化)の新奇要因であることを提起した(第130回大会)。本研究では、HGFのY198のニトロ化を認識する抗HGFモノクローナル抗体(クローン1C10と2F4)の特性を調べると共に、HGFのニトロ化抑制作用の有無を検証した。
【方法】リコンビナントHGFに1C10および2F4抗体をそれぞれ種々の終濃度で添加した後、pH 7.4の生理的条件下でペルオキシナイトライト(ONOO⁻)を加えニトロ化誘導処理を行った。抗ニトロチロシン抗体を用いたウエスタンブロッティングにより1C10および2F4抗体のニトロ化抑制作用を検証した。
【結果および考察】 1C10および2F4抗体はHGFのニトロ化の有無によって反応性が異なることから、ニトロ化を受けるY198の極近傍にこれらの抗体が結合すると考えられた。そこで、1C10・2F4抗体をHGFに結合させた後にニトロ化処理を行うと、抗体の濃度依存的に抗ニトロチロシン抗体に対する反応強度（HGFのニトロ化の指標）が顕著に減少した。この結果から、1C10および2F4抗体はY198の極近傍に結合し、立体障害となることで、HGFのニトロ化抑制作用を発揮すると洞察された。