[ODP-011] Bacterial transport by amoeba that depend on symbiotic bacteria involves the Na+/H+ antiporter NhaA
本研究室では以前，共生細菌としてNeochlamydia S13（クラミジアの一種）を持つアメーバ（S13アメーバ）が，ヒト病原性細菌（大腸菌，サルモネラなど）を固形培地上で共生細菌依存的に運搬する現象を報告した（Okubo et al, Environ Microbiol Rep, 2018)。トランスポゾン挿入株ライブラリーを用いたスクリーニングにより，その現象にはアメーバに運ばれる細菌のnhaA 遺伝子（Na+/H+逆輸送体，幅広い菌種がホモログを保持）が関与していることが示唆された。本研究では，運搬現象とnhaA遺伝子との関係性を明らかにするためにEscherichia coli DH5α（元株）からnhaA欠損株，再導入株を作出し実験に用いた。さらにNhaA阻害剤である2-Aminoperimidine（2-AP）を添加した培地でも実験を行った。運搬実験ではS13アメーバと細菌の混合液をLB寒天培地にスポットし，これを30℃で培養し経時的に観察した。その結果，欠損株では運搬現象が見られず，再導入株では再び見られた。グラム染色により菌体の形状を比較すると，欠損株は細長いフィラメント状となったのに対し，再導入株では元株と同様であった。2-AP添加試験では，濃度依存的に運搬現象は抑制された。高濃度の2-AP存在下では元株がフィラメント状となり，欠損株と同様の形態を示した。以上からnhaA遺伝子の欠損あるいは機能阻害によって細菌の形態が変化し，そのことが運搬現象の有無に影響していると考えられた。そこで，抗菌薬を用いて細菌のフィラメント状への形態変化を誘導した後，運搬現象が見られるかどうかの検討を進めている。