[ODP-119] Effect of organic acid from oral bacteria on initial attachment and colonization of Actinomyces oris
【目的】Actinomyces orisは初期付着菌として知られ，1型線毛（FimP, FimQ）を介して歯面上の唾液糖タンパク質への付着を行い，2型線毛（FimA, FimB）を介し共凝集が生じ，口腔バイオフィルムを形成する。口腔内に存在する有機酸である短鎖脂肪酸（SCFAs）は口腔細菌が産生する代謝産物である。本研究は，A. orisの初期付着・凝集（INAC）に対する有機酸の影響，線毛と有機酸の関係性の解明を目的とした。
【方法】A. oris MG1株（親株）と各線毛遺伝子欠損株はヒト唾液コートした6穴培養プレートにて0.25%スクロース添加TSB培地（TSBs）を用いて3時間前培養し，濃度設定したSCFAs添加TSBsを用いて1時間培養した。付着菌はLIVE/DEAD染色を行いCLSMによる観察か，回収しPBS希釈後にBHI寒天培地上で培養しコロニー数を計測した。
【結果】60mM SCFAs (pH4.7) はA. oris MG1のINACを増加させ，中でも酢酸や酪酸，プロピオン酸による生菌数の有意な増加を認めた。線毛遺伝子欠損株の短鎖脂肪酸刺激INACはMG1より減少した。MG1およびfimA遺伝子欠損株（ΔfimA）において，HCl (pH4.7) は60mM酪酸よりINACを減少させ，死菌も増加させた。NaOHで調整した60mM酪酸（pH7.2）によりMG1のINACは減少し，塩酸で調節した60mM酪酸Na (pH4.7) によりMG1のINACは増加した。5mM酪酸，15mMプロピオン酸，40mM酢酸の混合条件（pH4.7）は，60mM酪酸と同様の結果になった。この3つの短鎖脂肪酸の酸解離定数は4.7であった。
【考察】歯垢中から産生される有機酸の中でも酪酸，プロピオン酸，酢酸の単独および混合は，1型及び2型線毛依存的なA. orisの生菌の付着および凝集を刺激すると考えられた。その効果には，pH4.7における非解離酸の存在が重要と考えられた。
【方法】A. oris MG1株（親株）と各線毛遺伝子欠損株はヒト唾液コートした6穴培養プレートにて0.25%スクロース添加TSB培地（TSBs）を用いて3時間前培養し，濃度設定したSCFAs添加TSBsを用いて1時間培養した。付着菌はLIVE/DEAD染色を行いCLSMによる観察か，回収しPBS希釈後にBHI寒天培地上で培養しコロニー数を計測した。
【結果】60mM SCFAs (pH4.7) はA. oris MG1のINACを増加させ，中でも酢酸や酪酸，プロピオン酸による生菌数の有意な増加を認めた。線毛遺伝子欠損株の短鎖脂肪酸刺激INACはMG1より減少した。MG1およびfimA遺伝子欠損株（ΔfimA）において，HCl (pH4.7) は60mM酪酸よりINACを減少させ，死菌も増加させた。NaOHで調整した60mM酪酸（pH7.2）によりMG1のINACは減少し，塩酸で調節した60mM酪酸Na (pH4.7) によりMG1のINACは増加した。5mM酪酸，15mMプロピオン酸，40mM酢酸の混合条件（pH4.7）は，60mM酪酸と同様の結果になった。この3つの短鎖脂肪酸の酸解離定数は4.7であった。
【考察】歯垢中から産生される有機酸の中でも酪酸，プロピオン酸，酢酸の単独および混合は，1型及び2型線毛依存的なA. orisの生菌の付着および凝集を刺激すると考えられた。その効果には，pH4.7における非解離酸の存在が重要と考えられた。