[ODP-084] Intra-Macrophage Expression of ArtAB Toxin Gene in Salmonella
【背景】Salmonella Typhimuriumファージ型DT104 ，S. Worthington（SW）などのサルモネラ属菌が百日咳毒素と類似した毒素ArtABを産生することが報告されている．これまでの研究により，artAB遺伝子はマイトマイシンC ，H2O2などの処理により誘導的に発現することが知られているが，in vivoでの発現は不明である．そこで本研究ではDT104をマクロファージ様細胞RAW264.7に貪食させ，リアルタイムPCR法により細胞内におけるartABの発現について解析した．
【方法】DMEM培地でRAW264.7細胞を培養後，PMAを添加し，マクロファージ由来のH2O2産生を誘導した．そこへ一晩振とう培養し正常マウス血清によりオプソニン化したDT104を加えインキュベートした．その後，ゲンタマイシン処理により細胞外の菌を除去し，細胞を溶解して得られた細胞内の菌からtotal RNAを抽出した．このRNAを用いて，リアルタイムPCR法で各遺伝子の発現量を定量した．
【結果と総括】RAW264.7細胞内のDT104のartA発現量は，in vitroでの発現量と比較して有意に増加し，PMAで処理した群では，無処理群と比較し発現量がさらに増加していた．これらのことからartABはRAW264.7細胞内で誘導的に発現し，その発現誘導はマクロファージ由来のH2O2で増強することが示唆された．また，DT104ではoxyRとc1の発現量に有意な変化が認められなかったが，SWでは細胞内でoxyRとc1の有意に増加し，artAの有意な増加が見られなかった．以上より，マクロファージ内におけるDT104のartABはH2O2により誘導的に発現するが，SWのようにoxyRの発現応答が強い菌ではC1によりファージ誘導が抑制されるためにartABの細胞内発現が弱くなることが示唆された．