[ODP-119] Analysis of interaction between Bordetella BteA and human Moesin
Bordetella属細菌のBteAはIII型分泌装置により宿主細胞質内に移行した後，細胞膜破壊を伴う細胞死を誘導する．先行研究からBteAは，Ezrin, Radixinと共にERMファミリータンパク質に含まれるMoesinと相互作用することで，細胞膜破壊に関与している可能性が示されている．本研究では，BteAとMoesinの相互作用について解析を行った．まず細胞内でBteAとMoesinが共局在するかを調べるために，BteA-N600, N400, N200（N末端より600番目，400番目，200番目までのアミノ酸領域）とpEGFPの融合タンパク質をコードするプラスミドと，ERMファミリータンパク質とmStrawberryの融合タンパク質をコードするプラスミドを作製した．これらのプラスミドをCos7細胞に導入し，EGFPとmStrawberryの蛍光シグナルが共局在している細胞の数を計測した．その結果，Ezrin, Radixinを導入した細胞では有意な共局在は認められなかったが，Moesinを導入した細胞ではBteA-N600, N400において共局在が認められた．またBteA-N200においてはMoesinとの有意な共局在は認められなかった．次にin vitroでBteAとMoesinが結合するのか調べるために，細胞溶解液とBteA部分欠失変異体を混合しプルダウンアッセイを行った．その結果，MoesinとBteA-N600およびBteA-N（1~312アミノ酸領域）の結合は認められたが，BteA-C（313~658アミノ酸領域）との結合は認められなかった．蛍光顕微鏡観察の結果から，MoesinはBteAの201~400番目のアミノ酸領域で相互作用することが示唆された．またin vitroにおいて，MoesinはBteAのN末端側と結合することが示唆された．