[SW1] 共催企業ウェビナー1

[SW1] Principle of LAMP (Loop-mediated isothermal amplification) method and it’s application cases

Takuya Kaneko, Shigeki Koiwai, Takahiro Soejima (Eiken Chemical Co.,LTD.)

LAMP (Loop-mediated isothermal amplification) 法は栄研化学が独自に開発した遺伝子増幅技術である．
LAMP法では標的遺伝子の6領域に対して4種類のプライマーを設計する．また鎖置換活性を持つDNA合成酵素を用いることで，鋳型2本鎖DNAの1本鎖への変性ステップを含め，増幅/検出のすべての反応を等温で行うことができる．鋳型がRNAでも逆転写酵素を添加することで1ステップ，等温での増幅が可能である．本増幅原理により，高い特異性と迅速な標的遺伝子の検出が可能となっている．
LAMP法による遺伝子増幅を成功させるための条件の一つに，最適なプライマー設計が挙げられる．このプライマー設計において，栄研化学ではPrimerExplorer^® (http://primerexplorer.jp/) というLAMP法専用のプライマー設計支援ソフトを無償で利用できるようWeb上でサービスを提供している．LAMP法ではPCR法に比較してプライマー領域が多いため，ターゲットに変異が多い場合には，変異を避けたプライマー設計が難しくなる．そこで，遺伝子増幅に影響の少ない変異を許容するための，共通検出用プライマーの設計にもPrimerExplorer^®は対応している．また同ソフトは，特定の変異を検出するために，伸長末端に必ず変異を持たせる特異的検出用プライマーの設計も可能であり，LAMP法を活用する上での強力なツールとなっている．
LAMP法が2000年5月に技術公開されてから既に20年以上を経過する中で，本増幅原理の特徴を活かした応用方法の検討が，さまざまな国の多くの研究者によってなされてきた．本講演ではLAMP法の原理を中心に，その活用例について紹介を行う．