[ODP6B] b. 毒素・エフェクター・生理活性物質

[ODP-148] 一酸化窒素による腸管出血性大腸菌毒素Subtilase cytotoxinの阻害機構の解析

○津々木 博康¹，張 田力¹，八尋 錦之助²，小野 勝彦¹，赤池 孝章³，澤 智裕¹ (¹熊本大・院生命科学・微生物，²千葉大・院医・病原細菌制御，³東北大・院医・環境医学)

【目的】腸管出血性大腸菌O113株から同定された毒素Subtilase cytotoxin（SubAB）は，小胞体（ER）シャペロンであるBiPを切断し宿主細胞にERストレス性の細胞毒性を示す。我々は以前，SubABがマクロファージの一酸化窒素（NO）産生を抑制し，大腸菌の生存を亢進することを報告した。しかしSubABの毒性発現におけるNOの影響や酸化還元（レドックス）調節機構の関与はこれまで不明であった。そこで本研究では，SubABによる毒性発現にNOがどのような影響を及ぼすか調べることを目的とした。
【方法】ヒト上皮由来HeLa細胞にNOドナー存在下でSubABを処理した。SubABによるBiPの切断はウェスタンブロッティングにて解析した。各種阻害剤およびsiRNAを用い，宿主レドックス分子を探索した。
【結果と考察】NOドナー処理を行ったHeLa細胞ではSubABによるBiP切断が阻害された。阻害剤やsiRNAを用いた実験から，glutathione S-transferase（GST）の一種であるGSTPがSubABの毒性発現に関与することが示唆された。GSTPノックダウン細胞をNOドナーで処理しSubABによるBiP切断を評価した結果，コントロール細胞ではNOドナーによりSubABのBiP切断が阻害されたが，GSTPノックダウン細胞ではNOドナーによる阻害が回復した。以上の結果から，NOがSubABの阻害剤になること，GSTPが宿主レドックス調節分子としてNOによるSubABの阻害に寄与することが示唆された。現在，NOによるSubABの抑制機構について詳細な解析を進めている。