[3P-1] Poster 3 (3P-01ー3P-47)

[3P-12] Establishment of affinity purification system for structural and functional analyses of membrane proteins

^○Satoshi Ogasawara, Kousuke Inamura, Sisi Chen, Fuhito Nakagawa, Satoshi Yasuda, Takeshi Murata (Grad Sch. of Sci., Chiba Univ.)

【背景・目的】　膜タンパク質は、シグナル伝達、物質輸送、生体エネルギー産生・変換などの細胞機能において基幹的な役割を果たし、創薬標的としても非常に重要である。精製タンパク質は構造解析や化合物スクリーニングにおいて必要であるが、近年、膜タンパク質のフォーマットとしてナノディスクの有用性が高まっている。本研究ではモノクローナル抗体を用いたアフィニティ精製により、簡便、かつ高純度な膜タンパク質精製システム構築を試みた。
【方法】　当研究室で樹立した高親和性の抗 His-tag モノクローナル抗体 (iHis8) について性質決定を行った。さらに iHis8 固相化レジンを作製し、HEK細胞を用いて発現させたヒト由来アデノシンA_2a受容体についてアフィニティ精製の検討を行った。
【結果】　iHis8 の親和性は発現タンパク質への His-tag 付加位置、およびヒスチジン数によって異なっていた。iHis8 固相化レジンによるアフィニティ精製を行い、界面活性剤中での精製、およびレジン上でのナノディスク作製に成功した。精製膜タンパク質はいずれのフォーマットにおいても立体構造を保持していた。現在、クライオ電子顕微鏡による単粒子解析も行っている。
【まとめ】　我々が樹立した iHis8 の性質決定を行った。iHis8 の性質を基に抗体アフィニティ精製系を構築し、界面活性剤中での精製、およびナノディスク作製にも応用できた。この膜タンパク質精製システムは構造・機能解析において非常に有用である。