[XIV-29-10_12] 畜産物利用（XIV-午前）

[XIV29-10] 抗PD-1 scFvを産生する乳酸菌組換え体の構築

^○上田 麻未¹, 生井 楓², 重盛 駿¹, 荻田 佑³, 下里 剛士⁴ (1.信州大農, 2.信州大院総合理工, 3.信州大バイオメディカル研, 4.信州大菌類微生物セ)

【目的】抗PD-1 scFvは，免疫チェックポイント阻害薬として用いられる抗PD-1抗体を元に設計された低分子抗体である．我々は，抗PD-1 scFvの運搬体として乳酸菌組換え体（gmLAB [1]）に注目し，新たなガン治療法の提案を目指し，抗PD-1 scFvを産生するgmLABの構築を目的とした．
【方法】遺伝子ベクター（pNZ8148#2:CYT）に抗PD-1 scFv遺伝子を挿入し，pNZ8148#2:CYT-PD1 scFvを得た．Lactococcus lactis NZ9000に同ベクターを導入し，NZ-PD1 scFvを構築した．発現解析は，抗His-tag抗体を用いたWestern blotにて行った．組換え抗PD-1 scFvのPD-1結合能の検証は，ELISA法を応用した結合試験により行った．
【結果】Western blot解析の結果より，発現誘導後に組換え抗PD-1 scFvの推定分子量[29.6kDa]にバンドが観察された．菌体破砕物を用いた結合試験では，コントロールと比較して，NZ-PD1 scFvで高い吸光度が観察された．すなわち，組換え抗PD-1 scFvの優れたPD-1結合能が示唆された．
[1] Shigemori & Shimosato,Front Immunol, 8, 22, 2017