[P29-56] PacBio RS IIによるGABA高産生Lactococcus lactis subsp. lactis biovar diacetylactis 01-7の完全長ゲノム配列
【目的】γ-アミノ酪酸（GABA）生成力が強いL. lactis subsp. lactis biovar diacetylactis 01-7株は，発酵乳中にGABAに加えてオルニチンやシトルリン，アンジオテンシンI変換酵素阻害ペプチド等を生成した．本研究では01-7株のゲノム配列を解読し，その特徴を明らかにする．
【方法】01-7株対数期菌体を溶菌処理後，フェノール処理とエタノール処理により高純度の長鎖ゲノムDNAを調製した．これを用いて20 kbライブラリを作成し，1分子リアルタイムシーケンサーPacBio RS IIを用いてシーケンス解析を行った．
【結果】染色体（2,47 Mb，GC% 35.03）とプラスミド（38.7 kb，27.4 kb，14.4 kb，14.2 kb，14.0 kb，13.6 kb)の環状配列が構築された．01-7株染色体はL. lactis IL1403と最も高い相同性（カバー率95%, 同一性99%)を示した．プラスミドはBLAST検索でのtop hitが異なり，互いに相同な配列がなかったので，それぞれ独立したプラスミドと考えられた．また，電気泳動にて2.5 kb付近にバンドが観察されたが，これに対応するプラスミドは構築されなかった．そこで当該バンドを切り出し，大腸菌クローニングにより8.3 kbの環状配列を決定した．このプラスミドはクエン酸取り込みに関わるcitP遺伝子をコードしていた．
【方法】01-7株対数期菌体を溶菌処理後，フェノール処理とエタノール処理により高純度の長鎖ゲノムDNAを調製した．これを用いて20 kbライブラリを作成し，1分子リアルタイムシーケンサーPacBio RS IIを用いてシーケンス解析を行った．
【結果】染色体（2,47 Mb，GC% 35.03）とプラスミド（38.7 kb，27.4 kb，14.4 kb，14.2 kb，14.0 kb，13.6 kb)の環状配列が構築された．01-7株染色体はL. lactis IL1403と最も高い相同性（カバー率95%, 同一性99%)を示した．プラスミドはBLAST検索でのtop hitが異なり，互いに相同な配列がなかったので，それぞれ独立したプラスミドと考えられた．また，電気泳動にて2.5 kb付近にバンドが観察されたが，これに対応するプラスミドは構築されなかった．そこで当該バンドを切り出し，大腸菌クローニングにより8.3 kbの環状配列を決定した．このプラスミドはクエン酸取り込みに関わるcitP遺伝子をコードしていた．