[3Dp] 消化、吸収

[3Dp-03] Pro-Hyp の Caco-2 細胞膜透過挙動の解明

*中島 望吾¹、李 西西¹、坂野 新太²、松井 利郎² (1. 九大・院・生資環、2. 九大・院・農)

キーワード：コラーゲンペプチド、Caco-2 膜、透過試験、LC-MS、PepT1

【目的】Gly-Pro-Hyp 反復配列を有するコラーゲンの消化分解物である Pro-Hyp をはじめとするHyp含有ペプチドは腸管吸収される. Hyp 含有ペプチドは他のペプチドより高い腸管膜透過性を示すが,その要因は不明である. そこで，本研究では腸管上皮モデル細胞である Caco-2 細胞を用いた透過試験を実施し，Pro-Hyp の透過性に関わる因子の解明を試みた.【方法】配列および構造因子を明らかにするため, Pro-Hyp, Hyp-Pro, Pro-Pro, Hyp-Gly および Gly-Sar（GS）を対象としたCaco-2膜透過試験を実施した（ペプチド濃度：1 mM,透過時間：60 min）. 次いで, PepT1 基質であるGS（10mM）を用いた Pro-Hyp の透過試験を実施した （透過時間：30 min）.各試験では Caco-2 細胞を transwell（PET膜, 膜径1.0 µm）に播種し, 経上皮電気抵抗値 ＞ 400Ω/cm² の単層膜を用いた.ペプチドの定量は TNBS を用いたアミン誘導体化 LC-TOF/MSにより行った.【結果】各ペプチドの透過量（nmol/cm²）はPro-Pro (0.12) > Pro-Hyp (0.11) > GS (0.088) > Hyp-Gly (0.074) > Hyp-Pro (0.060)であり, Pro-Pro, Pro-Hyp は GS より高い透過性を有することが示された. 一方,Hyp-Gly, Hyp-Pro は GS より低い透過性を有し, N 末端 Hyp は膜透過に抑制的に働くことが示唆された. GS 共存下では, Pro-Hypの透過量（nmol/cm²）は有意に減少した（Pro-Hyp, 0.31; Pro-Hyp + GS, 0.19）.以上より, Pro-Hyp は PepT1 を介して輸送され, 透過性は PepT1 に対する親和性により決定されると推察された.